Corso di Laurea Magistrale in Biotecnologie Mediche - Classe LM-9

Biologia Cellulare

Anno accademico 2009/2010

• Biologia e Genetica (S7017)

Sommario insegnamento

• Programma
• Testi consigliati e bibliografia
• Strumenti didattici

Programma

1)      La produzione di proteine ricombinanti.
 
2)      La trasfezione delle cellule eucariotiche per l’espressione di proteine di interesse:
tecnica del Ca2+/fosfato, tecnica del DEAE-dextrano, i liposomi, l’elettroporazione, i vettori virali.
 
3)      L’analisi delle proteine cellulari in vitro (saggi qualitativi e quantitativi):
estrazione e purificazione delle proteine; analisi delle proteine mediante elettroforesi unidimensionale e bidimensionale, immunoprecipitazione, Western blotting, marcatura metabolica e saggi radioimmunologici; analisi dello stato di attivazione di proteine con funzioni regolatrici. Studi di interazione proteina-proteina: i saggi di “pull-down”; la tecnica del doppio ibrido.
 
4)      I controlli post-trascrizionali dei livelli di espressione delle proteine.
 
5)      L’analisi delle proteine cellulari in vivo (localizzazione, dinamiche subcellulari e funzioni):
microscopia ottica convenzionale e confocale; tecniche di immunofluorescenza ed immunocitochimica; l’uso delle proteine di fusione per l’analisi delle funzioni delle proteine; tecniche di microscopia a multifluorescenza in “time-lapse” per l’analisi delle dinamiche molecolari.
Le tecniche “F” e le loro applicazioni: “Fluorescence Resonance Energy Transfer” (FRET), “Fluorescence Recovery After Photobleaching” (FRAP), “Fluorescence Loss In Photobleaching” (FLIP).
 
6)      Analisi di processi cellulari: 
a)      I meccanismi di regolazione dell’espressione e funzione dei recettori adesivi.
b)      Il traffico vescicolare e le proteine della famiglia Rab: potenziali bersagli per interventi terapeutici.
c)      Le small GTPasi della famiglia Rho: ruoli fisiologici e patologici.
d)      I meccanismi di traslocazione nucleo-citoplasma delle proteine.




					Modalità d’esame
					

					Ricevimento degli studenti
					


1)      Stesura e presentazione di una tesina su un argomento del corso (gruppi di lavoro di 4-5 persone).
2)      Esame scritto: 3-4 domande a risposta aperta su argomenti del corso. 

presso Centro per le Biotecnologie Molecolari, via Nizza 52, Torino.
Tel. : 011-6706426; e-mail: francesco.retta@unito.it.